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    免疫熒光染色原理及步驟

    發(fā)布時(shí)間: 2022-12-01  點(diǎn)擊次數: 1600次

    免疫熒光染色原理及步驟


    免疫熒光又稱(chēng)免疫熒光抗體。免疫熒光實(shí)驗原理是將熒光素標記在相應的抗體上,直接與相應抗原反應。其優(yōu)點(diǎn)是方法簡(jiǎn)便、特異性高,非特異性熒光染色少,相對使用標記抗體用量偏大。利用抗原抗體反應進(jìn)行組織或細胞內抗原物質(zhì)的定位。

     

      下面詳細介紹免疫熒光染色步驟:

      1. 滴加 0.01mol/L,pH7.4 的PBS于待檢標本片上,10min后棄去,使標本保持一定濕度。

      2. 滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其全部覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時(shí)間(參考:30min)。

      3. 取出玻片,置玻片架上,先用 0.01mol/L,pH7.4 的 PBS 沖洗后,再按順序過(guò) 0.01mol/L,pH7.4 的 PBS 三缸浸泡,每缸 3-5 min,不時(shí)振蕩。

      4. 取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。

      5. 立即用熒光顯微鏡觀(guān)察。觀(guān)察標本的特異性熒光強度,一般可用“+"表示:(-)無(wú)熒光;(±)極弱的可疑熒光;(+)熒光較弱,但清楚可見(jiàn);(++)熒光明亮;(+++--++++)熒光閃亮。待檢標本特異性熒光染色強度達“++"以上,而各種對照顯示為(±)或(-),即可判定為陽(yáng)性。

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